Thiên Hạ Đệ Nhất Kiếm xoay quanh bối cảnh thời nhà Minh, khi tiên hoàng đã ra lệnh cho Chu Vô Thị, một vị thần hầu tài giỏi và uy tín, thành lập Hộ Long Sơn Trang. Đây là một tổ chức tập hợp những kỳ tài võ nghệ cao cường, có nhiệm vụ bảo vệ hoàng gia và duy trì sự ổn định của triều đình.
Hộ Long Sơn Trang nổi tiếng với hệ thống tình báo hàng đầu, có khả năng thu thập thông tin về mọi sự kiện xảy ra trên thế giới. Sau nhiều năm hoạt động, họ đã tích lũy được kho dữ liệu khổng lồ về hàng vạn người, cùng với những bí mật và mưu lược của họ. Bên cạnh Thần Hầu Chu Vô Thị, còn có tứ đại mật thám, những cánh tay đắc lực giúp ông thực hiện những nhiệm vụ khó khăn và nguy hiểm.
Họ đối đầu với thế lực phản động là Đông Xưởng, một tổ chức đối lập nguy hiểm đe dọa đến sự tồn tại của Hộ Long Sơn Trang và hoàng tộc. Tuy nhiên, khi cuộc chiến kéo dài, họ bắt đầu nhận ra rằng mình chỉ là những con cờ trong một ván cờ lớn, bị người ta sai khiến để phục vụ cho những mưu đồ soán ngôi.
Trong sự phức tạp và nguy hiểm của thế giới giang hồ, các nhân vật chính trong Thiên Hạ Đệ Nhất Kiếm buộc phải đối mặt với sự thật và đưa ra những quyết định khó khăn để bảo vệ chính mình và những người họ quan tâm.